噻唑蘭MTT的正確配置方法

上海信帆生物供應(yīng)噻唑蘭MTT，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，價(jià)格低廉！

稱取25mg MTT粉末溶解在5mg/ml的工作液，4℃保存。一周內(nèi)使用。

產(chǎn)品參數(shù)

其它名稱：噻唑蘭；噻唑藍(lán)溴化四唑；3-(4,5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide

298-93-1

分子式：C18H16BrN5S          

分子量：  黃色至橙色粉末

純度：  >98%

溶解性：溶于水(20 mg/ml)，緩沖鹽溶液(5 mg/ml)

結(jié)構(gòu)式：

噻唑蘭（MTT是一種可接受氫離子的化合物染料，帶正電荷，具有細(xì)胞膜滲透性?；罴?xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能夠?qū)⑼庠催M(jìn)入的MTT-甲臜結(jié)晶，而死細(xì)胞不具有此功能。甲臜結(jié)晶是不能穿透細(xì)胞膜，因此沉積在處于增殖且未受損傷的細(xì)胞內(nèi)。甲臜結(jié)晶可用570 nm的吸光度反映甲臜的生成量。而甲臜的生成量與活細(xì)胞數(shù)目成正比，用以評估細(xì)胞存活狀況。

使用方法：

1：接種細(xì)胞：用含10％胎牛血清的培養(yǎng)基配制單個(gè)細(xì)胞懸液，以每孔1000-10000個(gè)細(xì)胞量接種到96孔板，每孔體積200ul。

2: 培養(yǎng)細(xì)胞：正常培養(yǎng)及加藥等處理細(xì)胞。

3：呈色：培養(yǎng)及處理完畢后，PBS清洗每孔細(xì)胞后，每孔加MTT溶液20ul（5mg/ml用PBS配制，pH=7.4)，繼續(xù)培養(yǎng)箱孵育4 h。

4： 終止培養(yǎng)：小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液，對于懸浮細(xì)胞需要離心后再吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液。每孔加150ul DMSO，振蕩10min，使結(jié)晶物充分融解。

5：比色：490nm酶聯(lián)免疫監(jiān)測儀上測定各孔光吸收值，記錄結(jié)果，以時(shí)間為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)繪制細(xì)胞生長曲線。

噻唑蘭MTT的正確配置方法